پایان نامه روشهای ویروس شناسی تخم مرغ جنین دار، کشت سلول، Elisa، HI، PCR

مقدمه:

یکی از شاخصه های مهم درمان تشخیص صحیح و سریع عامل عفونی می باشد.

هم اکنون علم تشخیص جایگاه رفیعی در علم پزشکی پیدا کرده و سالیانه میلیاردها دلار سرمایه در جهت پیشرفت این علم هزینه می‌شود.

در بیماریهای عفونی دستیابی به تشخیص صحیح باعث می‌شود که درمان توسط پزشک به نحو مطلوبی انجام گیرد.

که نتیجه آن ارتقاء سطح بهداشت عمومی و از سوی دیگر اعتماد و اطمینان بیمار و پزشک به آزمایشگاه است.

انواعی از بیماریهای عفونی در انسان بوسیله ویروس ها ایجاد می شوند، برخی از این بیماریها فوق العاده کشنده بود، مثل هاری، هپاتیت، ایدز، تبهای هموراژیک و انسفالیت و برخی هم ناراحتیهای مختلفی در انسان ایجاد می‌کنند مثل سرماخوردگی، اوریون، عفونت با هر ویروس ها برخی مثل سرخچه و سیتومگالو ویروس ها ناهنجاریهای مادرزادی ایجاد می‌کنند بالاخره بعضی از ویروس ها تومور و سرطان ایجاد می‌کنند.

شیوع روز افزون بیماری های ویروس اهمیت و استفاده از روشهای پیشرفته در تشخیص این عوامل را بیش از پیش مطرح می سازد.

در سیر تکامل شعب مختلف علوم پزشکی رشته ویروس شناسی نیز مستثنی نبوده و پیوسته محققین آن در حال تکاپیو و تحقیق هستند که حاصل تجربیات آنها راهنمای ما در یافتن روشهای بهتر جهت تشخیص آزمایشگاهی بیماریهای عفونی است.

این دفتر تحت عنوان مروری بر روشهای ویروس شناسی با بررسی روشهای معمول ویروس شناسی به علاقمندان این رشته و دانشجویان علوم آزمایشگاهی و پزشکی تقدیم می‌گردد.

لازم است قید گردد این کتاب طوری طراحی شده و تنظیم شده که شخص علاقمند باید با مقدمات اولیه ویروس آشنایی داشته باشد.

تعداد صفحات 90 word

مقدمه

روشهای مختلف تشخیص آزمایشگاهی بیماریهای ویروسی برسه اصل استوار است

۱-۱ جداسازی ویروس

۱-۱- ب – جداکردن درکشت سلول

۱-۱-ج – کشت و جداکردن ویروس درحیوانات

۲-۱- تشخیص بیماریهای ویروسی توسط آزمایشهای سرمی

۳-۱- شناسایی بیماریهای ویروسی توسط آزمایشات ملکولی

تاریخچه تلقیح به تخم مرغ جنین دار

۲-۱- محاسن استفاده ازتخم مرغ جنین دار

۲-۲ منبع تهیه تخم مرغ

۳-۲ علائم رشد ویروس

۴-۲ ساختمان تخم مرغ جنین دارد

اعمال غشاء الانتوئیک شامل:

۵-۲ رشد جنین درسنین مختلف

۶-۲ راههای تزریق

۷-۲ موارد استعمال تخم مرغ جنین دار SPF درتشخیص ویروسها

الف-ویروسهائی که درتمام قسمتهای تخم مرغ جنین دار رشد می کنند.

ب-ویروسهائی که روی پرده کوریوالانتوئیک رشد کرده و ایجاد جراحات شدید می کنند.

ج-ویروسهائی که روی پرده کوریولاانتوئیک رشد کرده و ایجاد جراحات مختصر می کنند.

د-ویروسهای که درروی پرده کوریوالانتوئیک رشد کرده و ایجاد جراحت نمی‌کنند.

ه-ویروسهائی که درحفره الانتوئیک رشد می کنند.

و-ویروسهائی که درحفره آمنیوتیک رشد می کنند .

ی – ویروسهائی که درکیسه زرده رشد می کنند.

۸-۲- روشهای مختلف کشت عوامل ویروسی درتخم مرغ جنین دار SPF

مدمات تزریق

وسایل موردنیاز شامل

۹-۲ روش تزریق درحفره الانتوئیک

۱۰-۲ روش تزریق درحفره آمینوتیک

روش اول

روش دوم

روش سوم

۱۱-۲-تزریق در کیسه زرده

۱۳-۲-برداشت مایعات و غشاء های آلوده به ویروس ازتخم مرغ جنین دار تزریق شده

۳-کشت سلول Cell Culture

1-3-مقدمه ای برکشت سلول

۲-۳- موارد سودمند کشت سلول:

۳-۳-مواردی که کشت سلول با اشکال مواجه می‌شود.

۴-۳-کشت سلول اولیه Primary cell culture

5-3-جدا نمودن نسج مورد استفاده جهت کشت سلول اولیه

۶-۳-(تهیه کشت سلول اولیه به روش explant)

7-3-تهیه سلول اولیه به روش آنزیمی

۸-۳-هضم آنزیمی به روش تریپسین گرم

۹-۳-هضم آنزیمی به روش تریپسین سرد

۱۰-۳-استفاده از آنزیم های دیگر جهت هضم نسج

11-3-هضم مکانیکی

۱۲-۳-جداسازی سلولهای زنده و مرده

۱۳-۲-کشت سلول ثانویه، دیپلوئید:

۱۴-۳-هیستولوژی سلولهای دیپلوئید

۱۵-۳-خصوصیات رشد

۱۶-۳-منحنی رشد سلولهای دیپلوئید

۱۷-۳-رابطه بین ظرفیت تکثیر و مادر سلول

۱۸-۳-رابطه بین کشت سلولهای انسانی و سن(پدیده Hayflick)

19-3-کشت سلول معلق Suspension cell culcutre

۲۰-۳-روشهای کشت معلق:

۲۱-۳-روش Selection

۲۳-۳-عادت دادن یاخته به شرایط تعلیق Adaptation

23-3-شرایط لازم برای انجام یک کشت معلق سلول

24-3-خصوصیات محیط کشت سوسپانسیون:

۴ELISA -

1-4-مزیت تکنیک ELISA:

2-4-انواع روش‌های ELISA:

3-4-مراحل کار در ASILE

5-«ممانعت از هم اگلاتیناسیون»

روش آزمایش:

روش انجام آزمایش:

۵-۶-آزمایش PCR

آنزیم DNA Polymerase

داکسی نوکلئوتید تری فسفات

DNA الگو

غلظت یون منیزیم (Mg+2)

الف-اتصال پرایمر

ب-دمای تفکیک یا جداسازی DNA

ج-فعالیت آنزیم Taq DNA polymerase

 پرایمرها

بافر PCR و کمک کننده ها

سیکلهای PCR

مرحله اتصال

مرحله ساخت

تعداد سیکل

سیستم های الکتروفورز

دانلود پاورپوینت PCR با لینک مستقیم

´در گذشته معمولا از روش های شیمیایی برای تولید قطعات نوکلئوتیدی استفاده می‌کردند، اما این روش ها پر زحمت بوده و نیاز به مدت زمان طولانی داشتند از سال 1980 به بعد عمدتا از روش  PCR در آزمایشگاههای زیست شناسی مولکولی استفاده می‌شود.

این تکنیک در اواسط دهه ی 1980 بوسیله ی کری مولیس معرفی شد . به دلیل کاربردها و مزیت های بسیار زیاد آن به سرعت در زیست شناسی مولکولی گسترش پیدا کرد . امروزه این روش تقریباً در تمامی آزمایشگاهها ی زیست مولکولی جزو کارهای متداول می باشد و به صورت اتوماتیک بوسیله ی کامپیوتر انجام می شود