مقدمه :
کشت بافت گیاهی بطور خلاصه شامل کشت پروتوپلاست ,سلول,بافت و اندام گیاهی است. در همه این کشتها, رشد ماده گیاهی عاری از میکروب در یک محیط سترون مثل محیط کشت مغذی سترون در یک لوله آزمایش صورت می گیرد.در سال های اخیر, تکنیک های کشت بافت گیاهی به یک ابزار خیلی قوی برای تکثیر و اصلاح گونه های گیاهی زیادی تبدیل شده اند. این تکنولوژی با پژوهش گتلیب هابرلنت(Gottlieb Haberlandt) در مورد پر توانی سلول در اوایل قرن 20 شروع شد.وی با توجه به این نکته که با دستکاری محیط کشت سلولها , سلولهای کشت شده مراحل نموی یک رشد عادی را تکرار خواهند نمود , پیشنهاد گسترش تکنیک های جداسازی و کشت بافت های گیاهی را ارائه داد.
کشت اکسین ها توسط ونت Wentو همکاران و کشف سیتوکنین ها توسط اسکوگSkoog و همکاران, قبل از اولین کشت موفق بافت های گیاهی در آزمایشگاه صورت گرفت (گاتریت,1934 : نوبکورت , 1939).
اولین کشت موفق کالوس هویج و توتون توسط وایتWhite(1943)گزارش گردید. اسکوگ و میلر Miler(1957)گزارش کردند که اثر متقابل کمی بین اکسین ها و سیتوکنین ها نوع رشد و ریخت زایی گیاه را تعیین میکند. مطالعات آنها بر روی توتون نشان داد که نسبت بالای اکسین به سیتوکنین, ریشه زایی را تحریک نموده و پایین بودن این نسبت, باعث تحریک تشکیل اندام هوایی می شود اما این پاسخ, عمومی نیست. با این که دستکاری نسبت اکسین و سیتوکنین در ریخت زایی گونه های زیادی موفقیت آمیز بوده است, اما امروزه واضح است که عوامل زیاد دیگری بر توانایی سلولها در کشت برای تمایز ریشه, اندام هوایی و یا رویان موثر هستند.
مقدمه :
کشت بافت گیاهی بطور خلاصه شامل کشت پروتوپلاست ,سلول,بافت و اندام گیاهی است. در همه این کشتها, رشد ماده گیاهی عاری از میکروب در یک محیط سترون مثل محیط کشت مغذی سترون در یک لوله آزمایش صورت می گیرد.در سال های اخیر, تکنیک های کشت بافت گیاهی به یک ابزار خیلی قوی برای تکثیر و اصلاح گونه های گیاهی زیادی تبدیل شده اند. این تکنولوژی با پژوهش گتلیب هابرلنت(Gottlieb Haberlandt) در مورد پر توانی سلول در اوایل قرن 20 شروع شد.وی با توجه به این نکته که با دستکاری محیط کشت سلولها , سلولهای کشت شده مراحل نموی یک رشد عادی را تکرار خواهند نمود , پیشنهاد گسترش تکنیک های جداسازی و کشت بافت های گیاهی را ارائه داد.
کشت اکسین ها توسط ونت Wentو همکاران و کشف سیتوکنین ها توسط اسکوگSkoog و همکاران, قبل از اولین کشت موفق بافت های گیاهی در آزمایشگاه صورت گرفت (گاتریت,1934 : نوبکورت , 1939).
اولین کشت موفق کالوس هویج و توتون توسط وایتWhite(1943)گزارش گردید. اسکوگ و میلر Miler(1957)گزارش کردند که اثر متقابل کمی بین اکسین ها و سیتوکنین ها نوع رشد و ریخت زایی گیاه را تعیین میکند. مطالعات آنها بر روی توتون نشان داد که نسبت بالای اکسین به سیتوکنین, ریشه زایی را تحریک نموده و پایین بودن این نسبت, باعث تحریک تشکیل اندام هوایی می شود اما این پاسخ, عمومی نیست. با این که دستکاری نسبت اکسین و سیتوکنین در ریخت زایی گونه های زیادی موفقیت آمیز بوده است, اما امروزه واضح است که عوامل زیاد دیگری بر توانایی سلولها در کشت برای تمایز ریشه, اندام هوایی و یا رویان موثر هستند.
فهرست مطالب :
مقدمه ……………………………………………………………………………………………..1
انواع کشت درون شیشه ای …..…………………………………………………………………….3
کاربردهای کشت بافت گیاهی ……………………………………………………………………….4
روشهای سترون سازی ………..…………………………………………………………………...7
روش حرارت خشک …………………………………………………………………………..10روش حرارت مرطوب ………………………………………………………………………..12روش الترا فیتراسیون ……………………………………………………………………….15روش استریلیزاسیون شیمیایی …….…………………………………………………….….16نحوه تاثیر حرارت های بالا بر روی اجزای مدیوم کشت…………………………………………..…20
روش های پیشگیری از آلودگی ……………………………………………………………….......22
اجزای غذایی تشکیل دهنده مدیوم کشت بافتهای گیاهی………………………………………….….24
املاح معدنی….………………………………………………………………………….….24مواد تنظیم کننده رشد گیاهان..…….…………………………………………………….…..27ویتامینها ….………...…………………………………………………………………….31اسیدهای آمینه و آمید ها ….……………………………….………………………………..33مکملهای آلی کمپلکس ….……………………………………………………………………34ذغال ………………………………………………………………………………………35منابع کربن ……………………………………………………………………………......36مواد تنظیم کننده فشار اسمزی …..…………………………………………………………38آب……………………………………………………………………………………..…3910-ماده زمینه مدیوم کشت …….………………………………………………………………40
نحوه انتخاب مدیوم کشت…………………………………………………………………….....42
تهیه ریز نمونه…………………………………………………………………………………44
عوامل مربوط به گزینش ریز نمونه……….………………………………………………….….45
ایجاد و نگهداری کشت کالوس………….……………………………………………………......48
روش کار………………………..…………………………………………………………...57
نحوه بررسی نتایج بدست آمده……………..……………………………………………..…64
کشت سلول، بافت و اندام گیاهی.…………………………………………………………..…65
رشد و نمو گیاهان……………..……………………………………………………...……...66
کشت بافت گیاهی ………………………………………………………………………..…69
کشت سلول گیاهی ………………………………………………………………………….70
پروتو پلاستها ……………………………………………………………………………71
کشت اندام گیاهی ……………………………………………………………………..…..72
باز زایی گیاهان …………………………………………………………………………73
تکثیر گیاه در مقیاس بزرگ ……………………………………………………………….76
بانکها ی نطفه گیاهان ……………………………………………………………………77
منشاء ماهیت و اهمیت تنوع در کشت بافت …………………………………………………79
اساس تنوع سوماکلونال ………………………………………………………………… 81
تنوع ژنتیکی حاصل از گیاه پایه……………………………………………………………81
تنوع ژنیتکی ایجاد شده در مدت زمان کشت …………………………………………………82
دلایل تنوع سوماکلونال ……….……………………………………………………………..،،..83
ژنوم سیتوپلاسمی و تنوع سوما کلونال ………………………………………………………….85
دلایل تنوع اپی ژنیتک در کشت بافت ….………………………………………………………….85
استفاده از تنوع سوماکلو نال در اصلاح ..……………………………………………………..…89
فهرست منابع ………………………………………………………………………………….90
شلینک پرداخت و دانلود *پایین مطلب*
فرمت فایل:Word (قابل ویرایش و آماده پرینت)
تعداد صفحه:9
فهرست و توضیحات:
ارقام مورد استفاده در این آزمایش2 رقم گلوبال وآپشن از تیپهای بهاره ودوصفر می باشند و در چند سال اخیر کشت آنها در ایران رایج شده است.
3- 2- کشت بذور
بذور کلزا در داخل گلدانهایی با قطر cm25 کشت گردیدند. خاک مورد استفاده شامل دو قسمت خاک معمولی، یک قسمت خاک برگ، یک قسمت کود دامی، یک قسمت ماسه بود. در داخل هر گلدان 5 الی 6 بذر در قسمتهای مختلف گلدان کشت گردید و گلدانها پس از کشت بذور در داخل اتاقک رشد گروه اصلاح نباتات سازمان انرژی اتمی بخش کشاورزی هسته ای قرار گرفتند. دو هفته پس از سبز شدن بذور و اطمینان از رشد گیاهچهها، در هر گلدان 2 بوته حفظ گردیده و بقیه حذف شدند.
3- 3- شرایط اتاق رشدin vivo
نور اتاق رشدی که گلدانها در آن قرار داشتند با 6 لامپ 400 وات بخار سدیم تأمین می شد لامپها در ارتفاع 4/1 متری از سطح گلدانها قرار داشتند و شدت نور در اتاق رشد 30000 لوکس بود. از لحاظ فتوپریودی اتاق رشد روی 8/16 ساعت تاریکی و روشنائی و دمای روز و شب°C10/ °C15 تنظیم شده بود.
3- 4- مراقبتهای زراعی
مراقبتهای زراعی، شامل آبیاری، سم پاشی، محلول پاشی بود. برنامة آبیاری هر سه روز یکبار انجام گرفت. از نظر کنترل آفات و بیماریها یکی از آفاتی که به وفور در فیتوترون دیده شد شته بود که جهت دفع آنها از دیازینون 2/1 در هزار و متاسیستوکس 1 در هزار استفاده گردید و برنامة سم پاشی در هر دورة رشد گیاهان 2 مرتبه انجام گرفت. یکی از کارهایی که جهت جلوگیری از شیوع آفات و بیماریها انجام گرفت حذف برگهای زرد و مرده در قسمت تحتانی گیاه بود که در هر هفته یک بار این عمل انجام گرفت.به منظور تقویت گیاهان مادری از کودهای مغذی کامل استفاده گردید که این کود به صورت محلول پاشی هر دو هفته یکبار روی برگ گیاهان اسپری شد.
3- 5- برداشت غنچهها و تعیین مرحلة مناسب میکروسپورها جهت جنینزایی
گیاهان کلزای بهاره پس از 35 ـ 45 روز از کشت به تدریج شروع به غنچهدهی کردند که به منظور تعیین مرحلة مناسب میکروسپورها جهت جنینزایی، یک آزمایش سیتولوژیکی روی غنچهها انجام گرفت. بدین ترتیب که غنچه هایی با اندازههای مختلف 2-1، 3-2، 4-3، 5-4 و 6-5 میلیمتر از گیاهان مختلف به طور تصادفی انتخاب شدند. پس از انتخاب غنچهها با اندازههای فوق، از هر غنچه یک پرچم با پنس برداشته شد و روی لام قرار داده شد. سپس یک قطره استوکارمن 2% به آن اضافه گردید و با نوک سوزن پرچم را له کرده و دیواره و قسمتهای اضافی پرچم حذف گردید. سپس یک لامل روی آن قرار داده شد. و پس از تهیة نمونه از غنچه ها با اندازه های مختلف، نمونهها در زیر میکروسکوپ از نظر سیتولوژیکی بررسی شدند و مرحلة میکروسپور در هر نمونه تعیین گردید.
3- 6- محیطهای کشت، ایزولاسیون و باززایی در کشت میکروسپورهای کلزا
3- 6- 1- محیط ایزولاسیون میکروسپورها
محیط جداسازی یا استخراج میکروسپورها میکروسپورها را از سایر قسمتهای غنچه که طی آسیاب شدن ایجاد میشوند، جدا میکند.محیط استخراج میکروسپورها در این آزمایش طبق یک پروتکل کانادایی تهیه گردید..
شلینک پرداخت و دانلود *پایین مطلب*
فرمت فایل:Word (قابل ویرایش و آماده پرینت)
تعداد صفحه:93
فهرست و توضیحات:
چکیده
مقدمه
فصل اول : کلیات تحقیق
پیشگفتار
بیان مسئله
سوالات تحقیق
اهداف تحقیق
فرضیات
تعریف نظری وعملیاتی
اهمیت وضرورت تحقیق
پیشینه تحقیق
فصل دوم : ادبیات نظری تحقیق
گزارش تحقیق
کلیات و مبانی نظری
اهداف پژوهش
روش کار تحقیق
فصل سوم: روش شناسی پژوهش
روش تحقیق و تحلیل داده ها
فصل چهارم: داده های آماری
داده های آماری
فصل پنجم : نتیجه گیری و پیشنهادات
جمع بندی و نتیجه گیری
پیشنهادات
منابع و ماخذ
مقدمه :
کشت بافت گیاهی بطور خلاصه شامل کشت پروتوپلاست ,سلول,بافت و اندام گیاهی است. در همه این کشتها, رشد ماده گیاهی عاری از میکروب در یک محیط سترون مثل محیط کشت مغذی سترون در یک لوله آزمایش صورت می گیرد.در سال های اخیر, تکنیک های کشت بافت گیاهی به یک ابزار خیلی قوی برای تکثیر و اصلاح گونه های گیاهی زیادی تبدیل شده اند. این تکنولوژی با پژوهش گتلیب هابرلنت(Gottlieb Haberlandt) در مورد پر توانی سلول در اوایل قرن 20 شروع شد.وی با توجه به این نکته که با دستکاری محیط کشت سلولها , سلولهای کشت شده مراحل نموی یک رشد عادی را تکرار خواهند نمود , پیشنهاد گسترش تکنیک های جداسازی و کشت بافت های گیاهی را ارائه داد.